Чому саме непрямий антиглобуліновий тест (НАГТ)?
Необхідність організації імуногематологічних досліджень з питань виявлення антиеритроцитарних антитіл неповної форми або проведення проби на сумісність за системою Резус ставить перед фахівцями лабораторій питання який з методів обрати: із застосуванням 33% розчину поліглюкіну, 10% розчину желатини або антиглобулінового реагенту. Спробуємо розібратись.
Відомо, що алоантитіла до антигенів еритроцитів можуть виявлятися на різних етапах тестування сироватки: АВ0 – тестування, скринінг антитіл, проби на сумісність.
При цьому слід памʼятати, що алоімунні антиеритроцитарні антитіла можуть бути як повної, так і неповної форми, тому їх слід виявляти із застосуванням різних методів (таблиця 1).
Повні антитіла виявляються в реакції сольової аглютинації за різних температурних режимів: 37 ˚С, 20 ˚С, 4 ˚С.
Неповні антитіла виявляються за допомогою непрямої проби Кумбса або реакцій конглютинації з використанням колоїдів (желатин, поліглюкін, тощо). Нагадаємо, що саме неповні антитіла є найбільш трансфузійно небезпечними і відіграють ключову роль у виникненні гемолітичної хвороби новонароджених (ГХН).
Таблиця 1 Методи виявлення антиеритроцитарних антитіл
-
Антитіла до антигенів
Методи дослідження
на площині в сольовому середовищі
з 33% розчином поліглюкіну
з 10% розчином желатини
НАГТ
(пробірковий, в гелі)
Гелевий тест (залежно від типу карти)
AB
так
Так і ні,
в залежності від титру антитіл
так
ні
так
DCE
малоймовірно
так
так
так
Kk
малоймовірно
так
так
так
Fya , Fyb
ні
ні
так
так
Jka , Jkb
ні
ні
так
так
S
малоймовірно
ні
так
так
Lea , Leb
так
так
так
так
так
P
так
так
так
малоймовірно
так
MN
так
малоймовірно
так
малоймовірно
так
H
так
малоймовірно
так
малоймовірно
так
З таблиці видно, що чутливість методу визначення антиеритроцитарних антитіл, в тому числі проби на сумісність крові за антигенами системи Резус, із застосуванням 33% розчину поліглюкіну є низькою. Тому, застосовувати її у стаціонарних лікувальних закладах не рекомендується. Допускається виконання цієї проби при необхідності проведення переливання крові в екстремальних умовах, коли відсутнє відповідне обладнання, тощо.
В медичній практиці прийнято застосовувати проведення проби на сумісність крові за антигенами системи Резус із застосуванням 10% розчину желатини.
Необхідно зазначити, що під час визначення антиеритроцитарних антитіл, а також при проведенні проб на сумісність за системою Резус, можна виявити не тільки неповні ізоімунні антитіла до антигенів системи Резус (D, С, Е, с, е), а також до антигенів інших систем (Келл, Даффі, Кідд тощо). В цьому відношенні найбільш чутливою пробою є непряма проба Кумбса (НАГТ).
Памʾятаємо! Непряма проба Кумбса, непрямий тест Кумбса, непрямий антиглобуліновий тест (НАГТ) – це різні назви одного методу.
Непрямий антиглобуліновий тест (НАГТ) –
золотий стандарт імуногематології та «вищий пілотаж» навичок лікарів-лаборантів.
Станом на сьогодні НАГТ можна проводити в пробірках або в гелевих картах. Не кожна лабораторія може забезпечити проведення НАГТ за допомогою гелевих карт, але кожна лабораторія може запровадити метод у пробірках. Для проведення НАГТ в пробірках (визначення антиеритроцитарних антитіл неповної форми, проведення проби на сумісність за системою Резус) ПП «ГРУПОТЕСТ» пропонує діагностичні реагенти (таблиця 2), використання яких дозволить не просто провести пробу Кумбса, а й бути впевненими, що отримані результати є достовірними і їх можна брати до обліку.
Таблиця 2 Діагностичні реагенти «ГРУПОТЕСТ»® для проведення НАГТ у пробірках
-
№з/п
Назва реагенту
Призначення*
1
1.1 Діагностичний поліспецифічний антилюдський глобулін
анти-С3d IgМ/ IgG plus
або
1.2 Діагностичний антилюдський глобулін анти-IgG
Основні реагенти, без яких неможливо проведення НАГТ.
При виборі реагенту необхідно врахувати наступне:
реагент 1.1 під час інкубації зі свіжою сироваткою може давати хибнопозитивні результати;
при дослідженні аутоімунної гемолітичної анемії (АІГА) рекомендовано проводити дослідження з використанням обох реагентів з метою диференціальної діагностики.
2
НАБІР №5
Набір розчинів
Стандарт анти-D
Спеціальна сироватка АВ
Контроль правильності проведення НАГТ.
Приготування позитивного контролю (ПК) та контролю негативного результату тесту Кумбса (КНРК): стандарт анти-D + 20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh+поз. CcDEe (Набір 1-20 або 9-20).
Приготування негативного контролю (НК): стандарт анти-D + 20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh-нег. сcdеe (Набір 1-20 або 9-20) або спеціальна сироватка АВ +20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh+поз. CcDEe (Набір 1-20 або 9-20).
3
НАБІР №1-20
20% суспензія стандартних еритроцитів групи
0 Rh+поз. CcDEe;
0 Rh-нег. сcdеe;
А1 Rh+поз.; В Rh+поз.
або
НАБІР №9-20
20% суспензія стандартних еритроцитів групи
0 Rh+поз. CcDEe;
0 Rh-нег. сcdеe;
А1; В.
Контроль правильності проведення НАГТ.
Приготування позитивного контролю (ПК) та контролю негативного результату тесту Кумбса (КНРК): стандарт анти-D + 20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh+поз. CcDEe (Набір 1-20 або 9-20).
Приготування негативного контролю (НК): стандарт анти-D + 20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh-нег. сcdеe (Набір 1-20 або 9-20) або спеціальна сироватка АВ +20% суспензія стандартних еритроцитів групи 0 Rh+поз. CcDEe (Набір 1-20 або 9-20).
4
Контроль тесту Кумбса
Підтвердження правильності негативного результату антиглобулінового тесту в пробірках.
5
LISS «ГРУПОТЕСТ»® -
розчин низької іонної сили
Зменшення часу інкубації до 15 хвилин (з 60 хвилин)
*Подробиці застосування у відповідних інструкціях.